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用Pfu DNA聚合酶等高保真DNA聚合酶扩增得到的PCR产物为平末端，直接克隆比较困难。本试剂盒提供了含克隆载体的平末端DNA片段克隆试剂，极大提高了其克隆效率。

• 基于T4 DNA连接酶的平末端克隆。
  
• 优化的连接体系，极大降低载体自连。
  
• 使用蓝白斑筛选，一般95%以上的白转化子都是带有DNA插入片段的重组子。
  
• 可用于克隆高保真DNA聚合酶如Pfu、Pwo、DeepVent等DNA聚合酶扩增得到的PCR产物；也可以用于克隆一些产生平末端的限制性内切酶如EcoRV和SmaI等酶酶切产生的DNA片段；还可用于克隆由粘端DNA用DNA聚合酶补平后的得到的平末端DNA片段。

首次使用本制品时需要在平末端克隆B载体干粉管中加入22μL的超纯水，涡旋震荡30秒溶解，短暂离心后即可使用。没有用完的平末端克隆B载体溶液需要放-20℃保存。

• 按下表设置连接反应体系。
  

  成分	用量
  纯化后的平末端DNA片段	10ng
  10×平末端克隆缓冲液	1μL
  平末端克隆B载体溶液	1μL
  T4 DNA连接酶(5U/μL)	1μL
  超纯水	至10μL

• 37℃保温，60分钟。
  
• 连接产物可直接用于后续转化自备的大肠杆菌感受态细胞，37℃过夜培养。
  
  • 本制品使用的B载体是Amp抗性，故需要涂盘在含Amp的LB培养基上筛选重组子，同时还需要在LB培养基中加入终浓度是40μg/mL的LX-gal和终浓度是24μg/mL的IPTG，这样可以通过蓝白斑筛选来降低假阳性率到5%以下。白斑是重组子，蓝斑是非重组子。